用于T细胞恶性肿瘤免疫疗法的CD7表达阻滞剂和嵌合抗原受体的制作方法
技术特征：
1.一种工程化免疫细胞，其包含：
i)包含编码与定位结构域连接的靶结合分子的核苷酸序列的核酸，其中所述靶结合分子是与CD7特异性结合的第一抗体；和
ii)包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列的核酸，其中所述CAR包含4-1BB胞内信号传导结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域和与CD7特异性结合的第二抗体。
2.根据权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中与CD7特异性结合的所述第一抗体是第一单链可变片段(scFv)。
3.根据权利要求1或2所述的工程化免疫细胞，其中与CD7特异性结合的所述第二抗体是第二单链可变片段(scFv)。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
7.根据权利要求1至4中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述定位结构域包含选自下组的氨基酸序列：内质网(ER)滞留序列、高尔基体滞留序列、蛋白酶定位序列和源自CD8α、CD8β、4-1BB、CD28、CD34、CD4、FcεRIγ、CD16、OX40、CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、CD32、CD64、、FAS或的跨膜结构域序列。
8.根据权利要求7所述的工程化免疫细胞，其中所述定位结构域包含内质网(ER)滞留序列，其包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9的氨基酸序列。
9.根据权利要求7所述的工程化免疫细胞，其中所述定位结构域包含源自CD8αt铰链的跨膜结构域序列和包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的跨膜结构域序列。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述4-1BB胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列并且其中所述CD3ζ胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述CAR还包含铰链和跨膜结构域。
12.根据权利要求11所述的工程化免疫细胞，其中所述铰链和跨膜结构域包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
15.根据权利要求1至12中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述工程化细胞是工程化T细胞、工程化自然杀伤(NK)细胞、工程化NK/T细胞、工程化单核细胞、工程化巨噬细胞或工程化树突细胞。
17.一种工程化免疫细胞，其包含
i)与定位结构域连接的靶结合分子，其中所述靶结合分子是与CD7特异性结合的第一抗体；和
ii)嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含4-1BB胞内信号传导结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域和与CD7特异性结合的第二抗体。
18.根据权利要求17所述的工程化免疫细胞，其中与CD7特异性结合的所述第一抗体是第一单链可变片段(scFv)。
19.根据权利要求17或18所述的工程化免疫细胞，其中与CD7特异性结合的所述第二抗体是第二单链可变片段(scFv)。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
21.根据权利要求17至19中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
22.根据权利要求17至19中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
23.根据权利要求17至19中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述定位结构域包含选自下组的氨基酸序列：内质网(ER)滞留序列、高尔基体滞留序列、蛋白酶定位序列和源自CD8α、CD8β、4-1BB、CD28、CD34、CD4、FcεRIγ、CD16、OX40、CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、CD32、CD64、、FAS或的跨膜结构域序列。
24.根据权利要求23所述的工程化免疫细胞，其中所述定位结构域包含内质网(ER)滞留序列，其包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9的氨基酸序列。
25.根据权利要求23所述的工程化免疫细胞，其中所述定位结构域包含源自CD8α铰链的跨膜结构域序列和包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的跨膜结构域序列。
26.根据权利要求17至25中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述4-1BB胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列并且其中所述CD3ζ胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列。
27.根据权利要求17至26中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述CAR还包含铰链和跨膜结构域。
28.根据权利要求27所述的工程化免疫细胞，其中所述铰链和跨膜结构域包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列。
29.根据权利要求17至28中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
30.根据权利要求17至28中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
31.根据权利要求17至28中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
32.根据权利要求17至31中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述工程化细胞是工程化T细胞、工程化自然杀伤(NK)细胞、工程化NK/T细胞、工程化单核细胞、工程化巨噬细胞或工程化树突细胞。
33.一种药物组合物，其包含权利要求1至32中任一项所述的工程化免疫细胞和药学上可接受的载体。
34.一种产生权利要求1至32中任一项所述的工程化免疫细胞的方法，所述方法包括：
i)向免疫细胞内引入
a)包含编码与定位结构域连接的靶结合分子的核苷酸序列的第一核酸，其中所述靶结合分子是与CD7特异性结合的第一抗体；和
b)包含编码CAR的核苷酸序列的第二核酸，其中所述CAR包含4-1BB胞内信号传导结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域和与CD7特异性结合的第二抗体；并且
ii)分离包含与所述定位结构域连接的所述靶结合分子和所述CAR的工程化免疫细胞，从而产生所述工程化免疫细胞。
35.一种治疗有需要的受试者中的癌症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的工程化免疫细胞，从而治疗有需要的所述受试者中的癌症，
其中所述工程化免疫细胞包含：
i)包含编码与定位结构域连接的靶结合分子的核苷酸序列的核酸，其中所述靶结合分子是与CD7特异性结合的第一抗体；和
ii)包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列的核酸，其中所述CAR包含4-1BB胞内信号传导结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域和与CD7特异性结合的第二抗体。
36.根据权利要求35所述的方法，其中与CD7特异性结合的所述第一抗体是第一单链可变片段(scFv)。
37.根据权利要求35或36所述的方法，其中与CD7特异性结合的所述第二抗体是第二单链可变片段(scFv)。
38.根据权利要求35至37中任一项所述的方法，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
39.根据权利要求35至37中任一项所述的方法，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
40.根据权利要求35至37中任一项所述的方法，其中所述第一单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
41.根据权利要求35至38中任一项所述的方法，其中所述定位结构域包含选自下组的氨基酸序列：内质网(ER)滞留序列、高尔基体滞留序列、蛋白酶定位序列和源自CD8α、CD8β、4-1BB、CD28、CD34、CD4、FcεRIγ、CD16、OX40、CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、CD32、CD64、、FAS或的跨膜结构域序列。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述定位结构域包含内质网(ER)滞留序列，其包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9的氨基酸序列。
43.根据权利要求41所述的方法，其中所述定位结构域包含源自CD8α铰链的跨膜结构域序列和包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的跨膜结构域序列。
44.根据权利要求35至43中任一项所述的方法，其中所述4-1BB胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列并且其中所述CD3ζ胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列。
45.根据权利要求35至44中任一项所述的方法，其中所述CAR还包含铰链和跨膜结构域。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述铰链和跨膜结构域包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列。
47.根据权利要求35至46中任一项所述的方法，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
48.根据权利要求35至46中任一项所述的方法，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
49.根据权利要求35至46中任一项所述的方法，其中所述第二单链可变片段(scFv)包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变结构域。
50.根据权利要求35至49中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞是工程化T细胞、工程化自然杀伤(NK)细胞、工程化NK/T细胞、工程化单核细胞、工程化巨噬细胞或工程化树突细胞。
51.根据权利要求35至50中任一项所述的方法，其中通过静脉内输注、动脉内输注、腹腔内输注、直接注射到肿瘤内和/或手术后肿瘤床灌注、在人工支架内植入肿瘤部位或鞘内施用，将所述工程化细胞施用给所述受试者。
52.根据权利要求35至51中任一项所述的方法，其中所述癌症为T细胞恶性肿瘤。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述T细胞恶性肿瘤是早期T细胞祖细胞急性淋巴母细胞性白血病(ETP-ALL)。